ГЛАВНАЯ СТРАНИЦА ОБЗОР МЕТОДОВ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ НАЗАД
|
|
|
|
ГЛАВНАЯ СТРАНИЦА ОБЗОР МЕТОДОВ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ НАЗАД |
|
Тест
на образование телец Гейнца-Эрлиха по Дейчи
Качественный
метод Мотульского-Кемпбеля
Качественный
метод по Бернштеину
При несфероцитарных гемолитических анемиях возникает необходимость исследования активности ферментов в эритроцитах. В эритроцитах содержатся ферменты гликолиза, пентозофосфатного цикла, системы глютатиона, адениловой системы и других реакций обмена, блокада которых может быть связана с дефицитом ферментов.
Наиболее распространенной наследственной ферментопатией эритроцитов является дефицит глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФД), относящейся к ферменту пентозофосфатного цикла. Для диагностики дефицита Г-6-ФД наиболее достоверным является количественное определение активности ферментов в эритроцитах. В условиях практической работы могут быть выполнены качественные пробы, имеющие ориентировочное значение.
Инкубация эритроцитов с метиловым фиолетовым и появлением окрашенных телец в большом количестве в патологических эритроцитах.
0,5 % раствор метилового фиолетового в изотоническом растворе хлорида натрия.
Микроскоп.
Смешивают в пробирке равные количества крови и раствора метилового фиолетового. Тщательно перемешивают и оставляют на 10 мин. Готовят мазки на предметном стекле, накрывают покровным и микроскопируют с иммерсионным объективом.
У здоровых наблюдается образование в эритроцитах единичных красного цвета телец.
В патологических Г-6-ФД-дефицитных эритроцитах появляется большее количество телец (4—6). Проба не является специфичной для дефицита Г-6-ФД, так как тельца Гейнца появляются при передозировке сульфаниламидов, при отравлении анилиновыми красителями, при дефиците других ферментов (глютатион-редуктазы, 6-фосфоглюконатдегидрогеназы), у носителей нестабильных гемрглобинов.
В присутствии Г-6-ФД образуется NADPH, который обесцвечивает бриллиантовый крезиловый синий.
Не требуется.
В пробирке смешивают: 0,1 мл реактива 1; 0,1 мл реактива 2; 0,25 мл реактива 3; 0,2 мл реактива 4. В другую пробирку, куда заранее внесен 1 мл дистиллированной воды, добавляют 0,02 мл крови из пальца. Смешивают содержимое обеих пробирок, смесь покрывают 1—2 мл жидкого парафина и ставят на водяную баню при 37 °С. Отмечают время обесцвечивания смеси.
У здоровых раствор обесцвечивается через 40—55 мин.
Замедление обесцвечивания более 90 мин свидетельствует о дефиците Г-6-ФД. При гемолитической энзимодефицитнон анемии обесцвечивание наступает через 3—24 ч.
Принцип тот же, что и в методе Мотульского— Кемпбеля, но окраска бриллиантовым крезиловым синим заменена дихлорфенилиндофенолом.
Из этих растворов готовят реактивную смесь следующего состава: реактив 1—8 частей, реактив 2—1 часть, реактив 3—0,5 части и реактив 4—0,5 части.
Не требуется.
В пробирку с 1 мл дистиллированной воды вносят 0,02 мл крови из пальца. После наступления гемолиза добавляют 0,5 мл реактивной смеси. Оставляют на 15—20 мин при комнатной температуре. Через 15—20 мин оценивают изменение цвета смеси.
Обесцвечивание смеси происходит через 15—20 мин.
Более позднее обесцвечивание смеси свидетельствует о дефиците Г-6-ФД в эритроцитах. Неполное обесцвечивание через 30 мин соответствует уменьшению активности Г-6-ФД, а отсутствие обесцвечивания к этому времени свидетельствует о резком снижении активности фермента.
