ГЛАВНАЯ СТРАНИЦА ОБЗОР МЕТОДОВ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ НАЗАД
|
|
|
|
ГЛАВНАЯ СТРАНИЦА ОБЗОР МЕТОДОВ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ НАЗАД |
|
Мазки крови готовят на предметных стеклах, которые предварительно моют и обезжиривают.
Специальное оборудование не требуется.
Стекла (новые и бывшие в употреблении) помещают в эмалированную посуду в 2 % раствор хозяйственного мыла или стирального порошка на 8—10 ч. Кипятят в указанном растворе 5—10 мин, старые мазки предварительно стирают ветошью или ватным тампоном. Более длительное кипячение или использование алюминиевой посуды не рекомендуют, так как стекла мутнеют. Промывают в проточной воде. Насухо вытирают и помещают в смесь Никифорова на 30—60 мин. Насухо вытирают чистым полотенцем и хранят в широкогорлой чистой посуде с притертой пробкой. Чистые стекла рекомендуется брать либо пинцетом, либо за края (соприкосновение пальцев с поверхностью стекла оставляет жирные следы).
На сухое подготовленное описанным выше способом предметное стекло наносят мазок крови следующим образом. На стекло ближе к короткой стороне наносят стеклянной палочкой (или непосредственно из места укола пальца) небольшую каплю крови. Оставляют стекло в горизонтальном положении и размазывают каплю крови по стеклу с помощью чистого шлифованного стекла, помещая его под углом 45°; коротким ребром, подождав, пока вся кровь расплывется по нему, быстро проводят по предметному стеклу. Не следует сильно нажимать на стекло, так как при этом травмируются форменные элементы крови.
Мазки высушивают на воздухе и маркируют (лучше простым карандашом). Высохший мазок должен быть равномерно тонким, желтоватого цвета, достаточной величины (располагаться на 1—1,5 см от краев, занимать почти всю длину стекла) и оканчиваться «метелочкой». Толстые (густо-розового цвета) мазки не следует использовать, так как в них морфология клеток плохо различима.
Более качественные мазки крови получаются при использовании автоматических устройств: «Hemaprep» фирмы «Opton» (ФРГ), «Slide Spinner» фирмы «Corning Scientific Instruments» (США) и др., предназначенных для приготовления мазков. Благодаря такому устройству мазки получаются равномерные и имеют стандартные размер и толщину.
В качестве унифицированных приняты методы окраски по Нохту и Паппенгейму.
Реактивы для фиксации: метиловый спирт х. ч. или раствор эозинметиленового синего по Маю — Грюнвальду.
1. Раствор эозин-метиле-нового синего по Маю — Грюнвальду. При отсутствии готового раствора красителя его можно приготовить, растворив 1 г сухого красителя в 1000 мл метилового спирта. Раствор готов к употреблению через 4 дня.
2. Рабочий раствор азур-эозина по Нохту.
Кювета для фиксации и окраски мазков со штативом-контейнером (при отсутствии используют эмалированные лотки с установленными для стекол «рельсами» из пары стеклянных палочек, соединенных резиновыми трубками).
Фиксатор мазков наливают либо в кювету, либо в широкогорлую посуду с притертой пробкой. Высушенные на воздухе мазки помещают в контейнер, который опускают в кювету с фиксатором (или кладут по одному в посуду) на 5—10 мин. Вынимают контейнер со стеклами из кюветы (или вынимают пинцетом стекла и устанавливают в штативе), оставляют на воздухе до полного высыхания.
Высохшие фиксированные мазки, не вынимая из контейнера, помещают в кювету с рабочим раствором краски на строго определенное время, подобранное для каждой партии красителя (от 20 до 45 мин). При отсутствии кюветы с контейнером стекла помещают горизонтально на «рельсы» (мазком кверху) и наливают высокий слой (3—4 мл на мазок) рабочего раствора краски. Вынимают контейнер со стеклами из кюветы с красителем и помещают его в кювету с водопроводной водой (при отсутствии кюветы краску со стекол смывают, не снимая их с «рельсов», водопроводной водой). Высушивают мазки на воздухе.
Сухие нефиксированные мазки помещают в кювету с раствором Мая—Грюнвальда на 3—5 мин (или наливают на мазок, помещенный на «рельсы» высоким слоем). Контейнер с мазками ополаскивают в кювете с дистиллированной водой (или на мазок, помещенный на «рельсы», не сливая краситель, добавляют дистиллированную воду на 1 мин). Помещают контейнер с мазками в кювету с азур-эозиновой краской по Нохту (или наливают на мазок краску) на 8—15 мин. Смывают краску водопроводной водой.
Мазки высушивают на воздухе.
Производится так же, как и по Нохту; в качестве красителя используют готовый раствор Романовского—Гимзы, который перед употреблением разводят из расчета 1 капля краски на 1 мл дистиллированной воды. Время окраски устанавливают опытным путем для каждой новой партии красителя (25—40 мин).
Осуществляется с помощью специальных устройств: «Hematek» фирмы «Ames» (США), WL-600 фирмы «Veb Kombinat Medizin und Labortechnik» (ГДР) и др., в которые ручным способом загружают нефиксированные мазки. Последующее автоматическое дозирование красителей и буферных растворов обеспечивает стандартную и равномерную окраску мазков.
