Резистентность эритроцитов

Для оценки физико-химических свойств эритроцитов исследуют стойкость (резистентность) эритроцитов к различным воздействиям. Наибольшее распространение в клинической практике получило исследование осмотической резистентности эритроцитов.

Унифицированный метод определения осмотической резистентности эритроцитов
в модификации Л. И. Идельсона (1974).

Принцип

Количественное определение степени гемолиза эритроцитов в забуферных гипотонических растворах хлорида натрия.

Реактивы

Основной раствор (по своей осмотической концентрации соответствует 10 % раствору хлорида натрия) имеет рН 7,4, состав раствора: двузамещенный фосфат натрия (Na₂HPО₄)—27,31 г (или Na₂HPО₄*2H₂O— 34,23, г), однозамещенный фосфат натрия (NaH₂PО₄*2H₂О)—4,86 г, хлорид натрия— 180 г, дистиллированная вода — до 2 л. Раствор можно хранить в закрытой посуде в холодильнике в течение нескольких месяцев.

Основной раствор разводят в 10 раз и получают раствор, соответствующий по своей осмотической концентрации 1 % раствору хлорида натрия. Из этого раствора готовят рабочие растворы хлорида натрия следующих концентраций: 0,85; 0,75; 0,70; 0,65; 0,60; 0,55; 0,50; 0,45; 0,40; 0,35; 0,30; 0,20; 0,10%. Можно приготовить по 100 мл этих рабочих растворов и сохранять их в холодильнике. Годны в течение 2 нед.

Специальное оборудование

1. Фотоэлектроколориметр.
2. Термостат на 37 °С.

Ход определения

В две стерильные пробирки с предварительно внесенными 2 каплями гепарина берут по 1,5 мл крови, перемешивают и одну используют для исследования, вторую — оставляют на сутки в термостате. В ряд центрифужных пробирок (14 штук) разливают по 5 мл рабочих растворов хлорида натрия концентрации от 1 до 0,10 %. В каждую центрифужную пробирку добавляют по 0,02 мл перемешанной гепаринизированной крови и оставляют при комнатной температуре на 30 мин. Центрифугируют смесь крови с растворами хлорида натрия при 2000 об/мин в течение 5 мин. Из каждой пробирки сливают надосадочную жидкость и измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против холостой пробы.

Холостая проба — надосадочная жидкость в пробирке, содержащей 1 % раствор хлорида натрия.

Расчет

За 100% гемолиз принимают гемолиз в пробирке, содержащей 0,1 % раствор хлорида натрия. Вычисляют процент гемолиза в каждой пробирке, сравнивая величины экстинкции надосадочной жидкости с экстинкцией, принятой за 100 %, по формуле:

Процент гемолиза=Е_х*100 / Е_1, где
Е₁ — экстинкция надосадочной жидкости в пробирке с 0,1% раствором хлорида натрия;
Е_Х — экстинкция исследуемой пробы;
100 — процент гемолиза в пробирке с 0,1 % раствором хлорида натрия.

На следующий день повторяют исследование с кровью, инкубированной 24 ч при 37 °С.

Нормальные величины

У здоровых в свежей крови начало гемолиза отмечают при концентрации хлорида натрия 0,50—0,45 %, а полный гемолиз — при 0,40—0,35 % растворе хлорида натрия.

Клиническое значение

Исследование проводят при подозрении на гемолитическую анемию. Понижение осмотической резистентности, т. е. появление гемолиза эритроцитов при более высокой, чем в норме, концентрации хлорида натрия (0,70—0,75%), наблюдается при наследственном микросфероцитозе и некоторых наследственных несфероцитарных гемолитических анемиях, а также иногда при аутоиммунной гемолитической анемии. В ряде случаев понижение осмотической резистентности выявляется только при исследовании инкубированной крови. Повышение осмотической резистентности характерно для талассемии, гемоглобинопатий.

Литература.

Идельсон Л. И. В кн.:Справочник по функциональной диагностике / Под ред. И. А. Кассирского.— М., Медицина, 1970, с. 401.