Резус-фактор

Реакция конглютинации с применением желатина.

Принцип.

Эритроциты с наличием резус-антигена агглютинируют в среде с неполным антирезус-антителами в присутствии антиглобулиновои сыворотки.

Реактивы.

1. Групповые (по системе АВО) антирезусные сыворотки.
2. Стандартные эритроциты всех групп системы АВО.
3. 10 % раствор желатина (ампулированный).

Ход определения.

Кровь из локтевой вены необходимо брать в две пробирки. В одну пробирку с предварительно внесенным 1 мл 5 % раствора цитрата натрия — 3 мл, в другую — только 3 мл крови. Пробирки должны быть тщательно промаркированы. В сопроводительном направлении указывают полностью фамилию, имя, отчество и группу крови пациента.

Кровь, смешанная с цитратом натрия, служит источником эритроцитов. По одной капле (0,05 мл) исследуемых эритроцитов вносят в 3 химические пробирки. В первые две добавляют 0,1 мл антирезусной сыворотки различной серии соответствующей группы крови. Далее во все три пробирки доливают 0,1 мл (2 капли) 10 % раствора желатина, предварительно прогретого на водяной бане температуры 40—45 °С. Таким образом, 3-я.пробирка, в которой находятся только эритроциты и желатин, служит контролем на спонтанную агглютинацию в присутствии желатина. В целях одновременного определения резус-антител используются стандартные эритроциты 0(I) группы резусположительные, в которые добавляют сыворотку крови из пробирки без раствора цитрата и то же (что и в трех предыдущих пробирках) количество желатина. В качестве контроля необходимо использовать стандартные резусположительные и отрицательные эритроциты всех 0(I), А (II), В (III), АВ (IV) групп крови. Содержимое всех пробирок осторожно перемешивают, встряхивают и помещают в термостат при 46—48 °С на 30 мин. После термостатирования во все пробирки вносят по 8 мл 0,85 % раствора хлорида натрия и перемешивают осторожным ротированием.

Учет результатов.

Результат можно считать достоверным только при совпадении его в обеих пробирках разных серий антирезусной сыворотки и правильно прошедших контролях. Агглютинация эритроцитов в первых двух пробирках, видимая в проходящем свете или под микроскопом (в сомнительных случаях), указывает на наличие реэус-антигена. Склеивание эритроцитов в 4-й пробирке документирует неполные резус-антитела в сыворотке исследуемого. Если происходит агглютинация в 3-й пробирке, содержащей только эритроциты и желатин, результат реакции в первых двух пробирках не может быть учтен вследствие возможности неспецифической агглютинации.

Определение в грудном молоке (молозиве) резус-антител.

Грудное молоко в количестве 10—15 мл, взятое в пробирку, центрифугируют 10 мин при 1000 об/мин. Со дна пробирки отсасывают небольшое количество и 2—3 капли наслаивают на стандартные эритроциты 0(I) группы. Затем добавляют 0,1 мл 10 % раствора желатина и ставят в термостат при 46 °С на 30 мин. Дальнейший ход реакции и учет результатов (см. выше)

Источник ошибок.

Раствор желатина:

наличие помутнения, хлопьев, утрата способности «застывать» при температуре 4—8 °С может приводить к ложноположительным результатам.

Антирезусные сыворотки:

снижение титра антител при длительном или неправильном хранении (определяется в контрольных исследованиях каждый раз при использовании новой серии). Ошибки при использовании иногруппных сывороток.

Клиническое значение.

Определение резус-фактора обязательно при переливании крови и у беременных. В последнем случае необходимо исследование резус-фактора у отца будущего ребенка.

Прогноз гемолитической болезни зависит от динамики резус-антител, которые необходимо исследовать в течение беременности.