ГЛАВНАЯ СТРАНИЦА ОБЗОР МЕТОДОВ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ НАЗАД
|
|
|
|
ГЛАВНАЯ СТРАНИЦА ОБЗОР МЕТОДОВ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ НАЗАД |
|
| Определение антигена первичного рака печени и тератобластом в сыворотке и асцитическои жидкости |
| Принцип |
| Приборы и оборудование |
| Реактивы |
| Ход определения |
| Клиническое значение |
| Литература |
Моноспецифическая антисыворотка, помещенная в лунку агарового геля, диффундирует в нем. При наличии в исследуемой сыворотке или асцитической жидкости специфического эмбрионального антигена альфа-фетопротеина АФП — маркера первичного (но не вторичного или метастатического) рака печени или тератобластомы, он (антиген) образует в зоне эквивалентных количеств четкий преципитат с антителами антисыворотки.
Стандартный набор иммунодиагностикума (ИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи, Москва) в комплекте со штампом для пробивания лунок.
Подготовка иммунодиагностикума: содержимое ампул растворяют в изотоническом растворе хлорида натрия (объем растворителя указан на этикетке ампулы). Получают слегка опалесцирующий раствор.
Чистую стеклянную камеру подсушивают, проведя ее несколько раз над пламенем горелки, и помещают на горизонтальную поверхность. В камеру заливают 23 мл расплавленного 1 % прозрачного агара Дифко на изотоническом растворе хлорида натрия рН 7,0—7.2, с мертиолатом 1:10000 и закрывают покровным стеклом. Через 30—40 мин в застывшем агаре просекают контуры лунок стандартным штампом. Агаровые пробки отсасывают с помощью трубки, диаметр которой на 2.5—3 мм меньше диаметра трубок штампа, и получают лунки с ровными краями. В каждой камере можно отштамповать 6 фигур и провести анализ 12 испытуемых сывороток.
В центральную лунку фигуры заливают AT, а в две периферические, противоположные друг другу, лунки — AT иммунодиагностикума. Оставшиеся четыре боковые лунки заливают испытуемыми сыворотками и изотоническим раствором хлорида натрия. Реагенты вносят капиллярами в лунки вровень с поверхностью агара.
После заполнения лунок реагентами плексигласовую поверхность камеры смазывают тонким слоем технического вазелина, камеру закрывают стеклянной пластинкой и оставляют при комнатной температуре на 24—48 ч. Перед регистрацией результатов открытую камеру рекомендуется поместить на 1 ч в 10 % раствор NaCI. Такая обработка способствует исчезновению непрозрачных ореолов вокруг лунок с испытуемыми сыворотками, затрудняющих учет результатов.
Результаты реакции оценивают по плюсовой шкале.
Реакцию считают положительной, если линия преципитации иммунодиагностикума сливается с линией преципитации, образованной антигеном испытуемой сыворотки и антителами иммунодиагностикума. В зависимости от места слияния полос реакцию считают: слабоположительной (+), если слияние полос наблюдается у лунки с испытуемой сывороткой. Содержание альфа-фетопротеина в сыворотке больного меньше 50 мкг/мл; положительной (++), если линии преципитации иммунодиагностикума и испытуемой сыворотки находятся на одинаковом расстоянии от центральной лунки. Содержание альфа-фетопротеина в сыворотке больного 50 мкг/мл; резко положительной (+++), если линия преципитации испытуемой сыворотки диффузна и сдвинута в сторону центральной лунки, а линия преципитации иммунодиагностикума резко загибается в месте слияния с линией преципитации сыворотки больного. В некоторых случаях, когда реакция идет в сильном избытке антигена, содержащегося в испытуемой сыворотке, линия преципитации этого антигена с антисывороткой не образуется, а линия преципитации иммунодиагностикума резко обрывается. При таком типе реакции содержание альфа-фетопротеина в сыворотке больного больше 50 мкг/мл. В этих случаях необходимо повторно поставить реакцию с разведенной испытуемой сывороткой и установить идентичность выявляемого антигена альфа-фетопротеину иммунодиагностикума; отрицательной (—), если линия преципитации иммунодиагностикума достигает своими концами лунок с испытуемыми сыворотками, так же как и лунок с изотоническим раствором хлорида натрия.
Диагностическими считают все три описанных типа положительных реакций.
В редких случаях сыворотки больных дают неспецифическую реакцию с компонентами иммунодиагностикума. Как правило, это широкий диффузный преципитат, который образуется при взаимодействии испытуемой сыворотки как с антисывороткой, так и с антигеном иммунодиагностикума. Принципиальное отличие неспецифической реакции от специфической заключается в том, что образующийся преципитат никак не связан со специфической линией преципитации иммунодиагностикума: он либо пересекает специфическую линию преципитации, либо образуется независимо от нее. При обработке 10 % раствором NaCI неспецифический преципитат исчезает совсем или заметно ослабляется.
Выявление альфа-фетопротеина — высокоинформативный тест в диагностике гепатом. Он позволяет также дифференцировать первичные и вторичные гепатомы, установить этиологическую причину опухоли яичка. Однако в определенных ситуациях антиген может появляться в сыворотке или других биологических жидкостях рне связи с гепатомой или тератобластомой. АФП нередко и в высоких титрах может быть обнаружен при остром гепатите А. Но при этом заболевании повторные исследования выявляют нарастание и последующее снижение (!) уровня антигена в отличие от гепатомы, когда происходит неуклонное нарастание титров. В редких случаях острого алкогольного гепатита можно выявить антиген. В подобных ситуациях нарастание титров АФП отражает, по всей вероятности, активность процессов регенерации печеночной паренхимы. Иными словами, АФП выступает здесь как косвенный признак цирротической перестройки органа. Наличие антигена в околоплодных водах беременных — достоверный признак тяжелого врожденного уродства плода, позволяющий рекомендовать прерывание беременности. Появление альфа-фетопротеина в сыворотке беременных женщин во II и III триместре — физиологическое явление: проникновение эмбрионального антигена в кровоток беременной.
Приведенные факты свидетельствуют о необходимости повторных исследований материала при выявлении АФП.
