Унифицированный гемиглобинцианидный метод (1974).

Принцип.

Гемоглобин окисляют в метгемоглобин (гемиглобин) железосинеродистым калием (красная кровяная соль); образующийся с ацетонциангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемиглобинцианид) определяют колориметрически.

Реактивы.

1. Трансформирующий раствор:
           ацетонциангидрин                           0,5 мг
           калий железо-синеродистый      0,2 г
           калий железо-синеродистый      0,2 г
           натрия гидрокарбонат                   0,2 г
           натрия гидрокарбонат                   0,2 г
           дистиллированная вода                 1 г
   Раствор желтого цвета, прозрачный.
   При обесцвечивании или появлении осадка непригоден.
   Стабилен - в течение нескольких месяцев при хранении в посуде из темного стекла при комнатной температуре
2. Калибровочный раствор гемиглобинцианида. Можно использовать стандартный раствор фирмы «Имуна» (ЧССР) с концентрацией гемиглобинцианида 61,23 мг/100 мл и фирмы «Реанал» (ВНР) с концентрацией вещества 59,75 мг/100 мл. Это соответствует концентрации гемоглобина в крови 15,4 г/100 мл и 15 г/100 мл при разведении ее в 251 раз. Стандартные растворы хранят в холодильнике (в незамороженном виде) в защищенном от света месте.

Специальное оборудование.

Фотоэлектроколориметр (ФЭК-56М или другой).

Ход определения.

В пробирку к 5 мл трансформирующего раствора добавляют 0,02 мл крови (разведение в 251 раз). Содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют стоять на 10 мин. Измеряют на фото-электроколориметре при длине волны 500— 560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы (трансформирующий раствор). Измеряют при тех же условиях стандартный раствор.

Расчет содержания гемоглобина производят по калибровочному графику (см. ниже), построенному по стандартному раствору гемиглобинцианида, или по формуле:
где ЕОП — экстинкция опытной пробы; ЕСТ — экстинкция стандартного раствора; С— концентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе, мг%; К — коэффициент разведения крови; 0,001 — коэффициент для пересчета мг/100 мл в г/100 мл.

№ проб.	Стандартный раствор, мл	Трансформирующий раствор, мл	Содержание гемоглобина в крови, г %
1	—	6	«Холостая» проба
2	2	4	5
3	4	2	10
4	6	—	15

Измеряют против «холостой» пробы.

Определение содержания гемоглобина с помощью счетчика и гематологического автомата.

Принцип.

Гемоглобин окисляют в метгемоглобин (гемиглобин) железосинеродистым калием (красная кровяная соль); образующийся с ацетонциангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемиглобинцианид) определяют колориметрически.

Оборудование.

Счетчик или гематологический автомат.

Ход исследования.

Соответствует инструкции, приложенной к прибору.

Литература.

• Кушаковский М. С. Клинические формы повреждения гемоглобина.— Л., 1968, с. 22;
• Грибова И. А. Гематологическая норма.— В кн.: Руководство по гематологии /Под ред. А. И. Воробьева, Ю. И. Лорие. М.: Медицина, 1979, с. 52.